膽固醇的高效液相色譜HPLC檢測(cè)方案

【膽固醇】作用

  膽固醇廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)，尤以腦及神經(jīng)組織中豐富，在腎、脾、皮膚、肝和膽汁中含量也高。其溶解性與脂肪類似，不溶于水，易溶于乙迷等溶劑。膽固醇是動(dòng)物組織細(xì)胞所*的重要物質(zhì)，它不僅參與形成細(xì)胞膜，而且是合成膽汁酸，維生素D以及甾體激素的原料。膽固醇經(jīng)代謝還能轉(zhuǎn)化為膽汁酸、類固醇激素、7-脫氫膽固醇，并且7-脫氫膽固醇經(jīng)紫外線照射就會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素D3，所以膽固醇并非是對(duì)人體有害的物質(zhì)。膽固醇還是臨床生化檢查的一個(gè)重要指標(biāo)，在正常情況下，機(jī)體在肝臟中合成和從食物中攝取的膽固醇，將轉(zhuǎn)化為甾體激素或成為細(xì)胞膜的組分，并使血液中膽固醇的濃度保持恒定。當(dāng)肝臟發(fā)生嚴(yán)重病變時(shí)，膽固醇濃度會(huì)降低。而在黃疸性梗阻和腎病綜合征患者體內(nèi)，膽固醇濃度往往會(huì)升高。

膽固醇的高效液相色譜樣品處理過(guò)程

  精密稱取膽固醇粉末0.05g(準(zhǔn)確至0.1mg)，用無(wú)水乙醇溶解定容至50mL備用；再用無(wú)水乙醇稀釋至所需濃度。用0.45µm的有機(jī)系濾膜過(guò)濾，精密量取10µL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

膽固醇的高效液相色譜HPLC檢測(cè)方案色譜條件

色譜柱： C18反相色譜柱, 4.6 mm*250 mm，粒度5 µm

流動(dòng)相:甲醇

波長(zhǎng)：205nm

流速：1.0mL/min

進(jìn)樣量：10µL

柱溫：38℃

膽固醇的高效液相色譜HPLC檢測(cè)方案譜圖

高效液相色譜儀器配置

高壓輸液泵    0.001-9.999ml/min    1臺(tái)

紫外檢測(cè)器    190-700NM         1臺(tái)

手動(dòng)進(jìn)樣閥    含觸發(fā)開(kāi)關(guān)         1套

閥安裝支架                   1套

液相色譜柱    C18反相色譜柱       1支

微量進(jìn)樣器    100ul            1支

維護(hù)工具包    液相色譜啟動(dòng)工具  1套

色譜工作站    N2000或Clarify      1套

超聲清洗儀                   1套

真空抽濾裝置  帶真空泵           1套

分析天平      感量0.1mg         1 臺(tái)